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    細胞轉染方法的專題講解
    更新時間:2024-02-19   點擊次數:44次

    隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展,轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規工具。細胞轉染實驗是現代生物學研究中的重要技術手段之一。通過將外源DNA、RNA、蛋白質等引入目標細胞的實驗技術之一,研究者們可以揭示細胞的基因功能、蛋白質表達和相互作用,進而深入理解細胞生理過程和疾病發生機制。接下來我來為大家介紹一下常見的細胞轉染方法吧

    1.化學物質介導:磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法

    1)磷酸鈣共沉淀法:借助于形成一種DNA-磷酸鈣復合物沉淀黏附在細胞膜表面,通過細胞的內吞作用而使DNA被細胞捕獲。沉淀顆粒的大小和質量對于轉染的成功至關重要,也受pH值、鈣離子濃度、DNA濃度、沉淀反應時間、細胞孵育時間等因素影響??蛇m用于穩轉瞬轉,操作簡便花費相對較低,但轉染效率低,10-20%,并且重復性很差。

    2)脂質體轉染:帶正電的脂質體與帶負電的核酸磷酸基團形成DNA-陽離子脂質體復合物,再與細胞膜上的唾液酸殘基的負電核結合,可能經過內吞作用被導入細胞。該方法使用簡單,可攜帶大片段DNA,通用于各種類型的裸露DNA或RNA,能轉染各種類型的細胞,轉染效率、轉染的穩定性和可重復性大大提高。但轉染時需要去除血清,血清的缺失會導致細胞毒性增加;轉染效果也隨細胞類型變化大。

    2. 物理物質介導:電穿孔法、顯微注射

    1)電穿孔法:電穿孔是通過高強度的電場作用破壞細胞膜電位,瞬時提高細胞膜的通透性,從而吸收周圍介質中的外源分子。電穿孔法可適用于所有細胞類型的瞬時和穩定轉染,但是其高電壓脈沖導致細胞致死率非常高,并且對DNA和細胞的用量很大。

    2)顯微注射:需要使用精密的儀器,直接將外源性核酸注射至宿主細胞核內。多用于轉基因,由宿主基因組序列可能發生的重組,缺失,復制或者異位等現象使外源基因嵌入宿主的染色體中。但是轉染細胞數有限,多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞。

    3. 生物物質介導:病毒介導法

    1)逆轉錄病毒(RNA):通過病毒侵染宿主細胞的機制將外源基因整合到宿主細胞的染色體中,導致基因失活或激活癌基因,構建穩轉株??梢杂糜陔y轉染的細胞,原代細胞,體內細胞等,但攜帶基因不能太大(<8kb):,需考慮安全因素。

    2)腺病毒(雙鏈DNA):腺病毒除了卵細胞以外幾乎在所有已知細胞中都不整合到染色體中,因此不會干擾其它的宿主基因。瞬時表達,可以包裝8kb左右外源基因,轉染較容易,但是轉染效率不高。

    細胞轉染實驗作為一種重要的實驗手段,為我們探索細胞內的奧秘提供了有效的工具。根據實驗需求和細胞特性,選擇合適的轉染方法非常重要。像細胞狀態和密度、培養基、載體大小等多方面因素都會影響到我們最后的轉染效率,所以細胞轉染是一個常見但是卻并不簡單的實驗。

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